產品簡介

螢火蟲螢光素酶是一種分子量約為61kD的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發出生物螢光(bioluminescence) [1]。海腎螢光素酶是一種分子量約為36kD的蛋白，在氧氣存在的條件下，可以催化coelenterazine氧化成coelenteramide，在coelenterazine氧化的過程中也會發出生物螢光。生物螢光可以通過化學發光儀(luminometer)或液閃測定儀進行測定[2]。本試劑盒的檢測原理參考圖2.

圖2. 雙螢光素酶的檢測原理圖。

通過螢光素酶和其底物這一生物發光體系，可以非常靈敏、高效地檢測基因的表達。通常把感興趣基因的轉錄調控元件或5'啟動子區克隆在luciferase的上游，或把3'-UTR區克隆在luciferase的下游等，構建成報告基因(reporter gene)質粒。然后轉染細胞，用適當藥物等處理細胞后裂解細胞，測定螢光素酶活性。通過螢光素酶活性的高低來判斷藥物處理等對目的基因的轉錄調控作用。Renilla luciferase相對更多地被用作轉染效率的內參，以消除細胞數量和轉染效率的差異.

雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒(Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit)，是先以螢光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲螢光素酶(Firefly luciferase)，后以腸腔素(coelenterazine)為底物來檢測海腎螢光素酶(Renilla luciferase)，并且在后續加入海腎螢光素酶底物時，同時加入抑制螢火蟲螢光素酶催化luciferin發光的物質，該物質可以淬滅約99.9%以上的螢火蟲螢光素酶信號，使后續檢測僅僅檢測到海腎螢光素酶的活性，從而實現雙螢光素酶報告基因檢測。