產品簡介

細胞衰老（Cell senescence）是指細胞在執行生命活動過程中，隨著時間的推移，細胞增殖與分化能力和生理功能逐漸 發生衰退的變化過程。通常情況下，機體會對衰老細胞進行清除，而未被清除的衰老細胞則可能會體內積累，引起低水平的 炎癥，或進一步誘導臨近組織衰退、癌變等。細胞衰老的一些特征包括細胞形態改變、細胞周期停滯、衰老相關分泌表型、 大分子損傷及代謝紊亂等。目前，鑒別細胞衰老特異性最強的標志為衰老相關 β-半乳糖苷酶 (senescence associated β galactosidase, SA-β-Gal)，隨著細胞的衰老其會逐漸累積，而在衰老前細胞、靜止細胞和終末分化細胞中則是缺乏的。

本試劑盒利用衰老細胞中的β-Gal在pH為6.0時可以催化5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷（5-bromo-4-chloro-3- indolyl-β-D-galactopyranoside, X-gal)水解生成藍色物質，從而可在光學顯微鏡下觀察到細胞或組織的衰老狀況。 以貼壁細胞（6孔板）舉例，每孔1 mL染色工作液，100 mL可用于100個孔的染色。

產品組成

儲存及運輸條件： -20℃保存，其中 B 組分 X-Gal 溶液需避光保存。 冰袋運輸，

使用方法

1.貼壁細胞染色（6孔板為例）

1.1，細胞鋪板過夜，待細胞生長至 60% - 80%匯合度時可以進行實驗。

1.2，去除細胞培養液，用 PBS 清洗 1 次。

1.3，加入 1 mL β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定 10~15 min。

1.4，去除 β-半乳糖苷酶染色固定液，用 PBS 清洗 3 次，每次 2-3 min。

1.5，根據表1配置染色工作液，具體染色工作液總量請根據樣本類型、樣本數等進行計算。 

表1. 染色工作液

【注】：① 為減少樣本染色過程中出現結晶現象，建議X-Gal使用前可適當37℃加熱1-3 h。

② 染色工作液需要現配現用，并 盡量在15 min內用完。

1.6，去除PBS，每孔加入1 mL染色工作液，37℃無CO2培養箱孵育過夜。【注】：為防止液體蒸發影響染色結果，建議在邊緣孔中加入水或PBS，減少“邊緣效應”，同時用封口膜或保鮮膜封住孔板。

1.7，普通光學顯微鏡下進行觀察計數。

1.8，可選：去除染色工作液，加入 2 mL PBS，4℃可保存數天。

2. 懸浮細胞染色 

2.1，收集細胞，2500 ×g 離心 10 min，用 PBS 清洗 1 次。

2.2，加入 1 mL β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定 10-15 min。 注：可將細胞放置搖床上緩慢搖動，以避免細胞結團。

2.3，2500 ×g 離心 10 min，去除 β-半乳糖苷酶染色固定液，用 PBS 清洗 3 次，每次 1-3 min。

2.4，根據表 1 配置染色工作液，具體染色工作液總量請根據樣本類型、樣本數等進行計算。

2.5，2500 ×g 離心 10 min，去除 PBS。每管加入 0.5-1 mL 染色工作液，37℃孵育過夜。

2.6，吸取部分細胞滴加到載玻片上或 6 孔板內，普通光學顯微鏡下進行觀察計數。

2.7，可選：去除染色工作液，再加入 1 mL PBS，4℃可保存數天。

注意事項

1）使用前請將產品瞬時離心至管底，再進行后續實驗。

2）細胞衰老β-半乳糖苷酶檢測依賴于特定的 pH 條件，而CO₂培養箱中較高濃度的CO₂會影響染色工作液的 pH 值，因此， 37℃孵育不能在 CO₂培養箱中進行。

3）X-Gal溶液在-20℃或4℃保存會凍結，室溫或37℃水浴2-5 min并適當搖動即可完全融解，若需要分裝該溶液或配置染色工作液，需要使用聚丙烯 (PP) 或玻璃材質的耗材，不要使用聚苯乙烯（PS）耗材，如細胞培養板、血清移液管等。

4）β-半乳糖苷酶染色液B的管底可能存在少量沉淀，屬正常現象，請充分震蕩渦旋，待全部溶解后再進行染色實驗。

5）如需染色切片樣本，請參考相關文獻并進行預實驗摸索方案。

6）β-半乳糖苷酶染色固定液存在一定的毒性和腐蝕性，為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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