產品簡介

1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride, EDC HCl）是一種水溶性碳二亞胺衍生物，用于偶聯半抗原到蛋白和多肽上。EDC HCl能用來修飾NMDA受體，以及肽合成中用作一種縮合劑。 

EDC HCl是一種零長度交聯劑，用來偶聯羧基到伯胺上。這一交聯劑應用非常廣泛，比如：肽合成中形成酰胺鍵，連接半抗原到載體蛋白上形成免疫原，通過5’磷酸基團標記核酸，制備生物分子具胺反應指向的N-羥基琥珀酰亞胺酯（NHS Ester）。

EDC首先與羧基反應產生一個具胺反應性的O-酰基異脲中間體，如果這一中間體未碰到胺，會水解再生成羧基。當體系內含N-羥基硫代琥珀酰亞胺（sulfo-NHS），EDC能將羧基轉化成具胺反應性的N-羥基硫代琥珀酰亞胺酯（sulfo-NHS ester）。這一步只需將EDC與含羧基分子混合，并加入sulfo-NHS即可完成。

產品特性

CAS ：25952-53-8

同義名：EDC Hydrochloride; EDAC HCl; EDAC Hydrochloride; WSC HCl; N-(3-Dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide hydrochloride; 3-(ethyliminomethylideneamino)-N,N- dimethylpropan-1-amine hydrochloride; 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride;

中文同義名：EDC鹽酸鹽；EDAC 鹽酸鹽；WSC 鹽酸鹽；1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽；N-乙基-N′-(3-二甲基氨丙基)碳二亞胺鹽酸鹽；

純度：≥99%；

外觀：白色至灰白色粉末；

溶解性：溶于水；

存儲及運輸條件：-20℃干燥保存，至少2年有效。冰袋運輸。

關聯產品：Dicyclohexylcarbodiimide, DCC二環己基碳二亞胺；EDC HCl；Dehydrating agent脫水劑；Carboxyl activating agent羧基活化劑；Peptide synthesis多肽合成；

操作步驟【僅做參考】

一、用EDC將半抗原偶聯到載體蛋白上

1.1   所需材料

載體蛋白：2mg 牛血清白蛋白（BSA）、卵清白蛋白（OVA）或鑰孔血藍蛋白（KLH）

共軛緩沖液：0.1M MES，pH 4.5~5

EDC：10mg

半抗原：1~2mg

離心脫鹽柱或其他具5~6k截留分子量的凝膠過濾柱

1.2   偶聯步驟

1）將EDC平衡至室溫；

2）加入2mg BSA、OVA或KLH到200μl共軛緩沖液；

3）在500μl共軛緩沖液中溶解高達2mg的肽或半抗原，并將其加入200μl載體蛋白溶液中。

4）對于BSA或OVA偶聯，將10mg EDC溶于1ml超純水中，并且立即加100μl該溶液到載體蛋白-多肽溶液。對于KLH偶聯，將10mg EDC溶于1ml超純水中，并且立即加50μl該溶液到載體蛋白-多肽溶液。如果出現沉淀，之后減少EDC用量。

5）室溫反應2h。

6）使用脫鹽柱純化偶聯物。如果需將免疫原儲存數日，需過濾除菌，并在4℃或-20℃下保存于無菌管內。

二、用EDC和NHS（或Sulfo-NHS）兩步法偶聯蛋白

【注意】以下步驟引用自Grabarek and Gergely，能夠順序偶聯兩個蛋白，并且不會影響第二個蛋白的羧基。此步驟需含巰基化合物淬滅第一個反應。

【注意】EDC與Sulfo-NHS的活化反應在pH 4.5~7.2最有效。然而，NHS活化或Sulfo-NHS活化分子與伯胺的反應在pH 7~8最有效。為了得到最佳結果，第一步反應在pH 5~6的MES緩沖液（或其他非胺非羧酸鹽緩沖液）內進行，之后用磷酸鹽緩沖液（或其他非胺緩沖液）提高pH到7.2~7.5，立即進行與伯胺分子的反應。為了淬滅第一步反應，使用2-ME或通過脫鹽柱進行緩沖液交換，可以簡單的除去過量試劑。

2.1 所需材料

活化緩沖液：0.1M MES，0.5M NaCl，pH 6.0

偶聯緩沖液：磷酸鹽（PBS），100mM 磷酸鈉，150mM NaCl，pH 7.2

蛋白1：制備于活化緩沖液（1mg/ml）

蛋白2：制備于偶聯緩沖液

NHS或Sulfo-NHS

2-ME

【可選】脫鹽柱或其他凝膠柱

羥胺鹽酸

2.2  偶聯步驟

1）開瓶前將EDC和NHS平衡至室溫。

2）向1 ml蛋白1溶液中加入0.4 mg EDC（~2 mM）和0.6 mg NHS或1.1 mg Sulfo-NHS（~5 mM），室溫下反應15min。

3）加入1.4 μl 2-ME（終濃度為20 mM）以淬滅EDC。

4）【可選】：使用已經用偶聯緩沖液（PBS）平衡的脫鹽柱將蛋白質與過量的還原劑和滅活的交聯劑分開。

5）將蛋白2以與蛋白質1等摩爾比加入活化的蛋白中。室溫反應2h。

6）為了淬滅反應，加入羥胺至終濃度為10 mM。此方法水解蛋白1上未反應的NHS，生成異羥肟酸。

7）使用脫鹽柱除去過量的淬滅劑。

注意事項

1）本品對濕度敏感。與強氧化劑不兼容。

2）本品與皮膚接觸可能引起過敏，請操作過程中做好防護工作，避免與身體的任何接觸。

3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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