FITC標(biāo)記荊豆凝集素組織化學(xué)染色步驟
發(fā)布日期：2019/10/30 14:00:42
FITC標(biāo)記荊豆凝集素組織化學(xué)染色步驟
1．組織切片經(jīng)脫蠟處理，若是Bouin液固定的組織，用70％乙醇洗3次除去組織切片內(nèi)的黃色后，再用蒸餾水漂洗；
2．PBS漂洗(含1％牛血清白蛋白)2次，每次5分鐘；
3．加入FITC-凝集素(PBS適當(dāng)稀釋)，置濕盒內(nèi)孵育，室溫1小時(shí)；
4．PBS漂洗3次，每次5分鐘；
5．水溶性封片劑封片，熒光顯微鏡觀察。
6．結(jié)果 FITC標(biāo)記的凝集素能直接與組織細(xì)胞內(nèi)的糖基結(jié)合，從而顯示糖基的位置，可用于檢測(cè)組織細(xì)胞中的糖成分，陽(yáng)性部位呈黃綠色熒光。
注意事項(xiàng)
(1)固定液：以Bouin固定液為佳，也可用70％乙醇固定；
(2)與其他組織化學(xué)方法一樣，染色過(guò)程中，應(yīng)始終保持一定濕度，使切片保持濕潤(rùn)狀態(tài)；
(3)需經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定FITC-凝集素的*佳工作濃度；
(4)凝集素的活性部位需重金屬離子維持，故可用TBS作為緩沖液，加微量的金屬(CaCl2、MgCl2、MnCl2各1．0mmol/L)，可增強(qiáng)凝集素的結(jié)合能力。
FITC標(biāo)記凝集素染色
FITC標(biāo)記的伴豆素I-B4染色示大鼠脊神經(jīng)節(jié)中小型神經(jīng)元伴豆素I-B4結(jié)合位點(diǎn)
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